载脂蛋白A1、B基因多态性对非创伤性股骨头坏死发生的影响

目的:探讨载脂蛋白A1、B基因多态性对非刨伤性股骨头坏死(avascular necrosis of the femoral head,ANFH)发生的影响.方法:应用聚合酶链反应对中国北方汉族143例ANFH患者和92例正常人分别扩增含Apo AI基因启动子-75 bp和第一内舍子 83 bp及Apo B基因Eco RI、XbaI和3-VNTR的DNA片段,限制性内切酶酶切扩增产物,琼脂糖凝胶电泳分离基因多态性.结果:Apo A1基因启动子-75 bp处,ANFH患者中A/A基因型频率明显高于正常组(P＜0.01),而G/A基因型频率明显低于正常组(P＜0.01).Apo AI内舍子 83 bp位点,Apo B基因Eco RI、Xba I位点和3-VNTR区域ANFH患者组和正常组基因型及等位基因频率分布无统计学差异.结论:Apo A1基因启动子区域-75bp位点A/A型可能是非创伤性股骨头坏死易感基因之一,但未能发现Apo A1第一内舍子 83 bp位点及Apo B基因Eco RI、XbaI和3-VNTR位点多态性与非创伤性股骨头坏死发生有明显的关系.     

人参皂苷Rg1与Rh1对树突状细胞表达HLA-DR、CD25、CD44、CD54、CD11c及E-selectin的影响

目的：观察人参皂苷Rg1和Rh1对树突状细胞（Dendritic cell，DC）表面分子CD25、HLA-DR、CD44、ICAM-1、CD11c及E-sclectin表达的影响。方法：用不同浓度的Rg1和Rh1分别加入成熟DC中，刺激一定时间后，用免疫组化法观察，并用图像分析法分析结果。结果：除E-selectin外，Rg1和Rh1均可不同程度地促进HLA—DR、CD25、CD11c、CD44和ICAM-1的表达。结论：Rg1、Rh1可增强DC表面促进T细胞活化的第一、二类信号系统分子的表达，提高其抗原递呈能力，并促进DC—T细胞簇的形成而活化初始T细胞。     

冠心病心阳虚痰瘀互结证大鼠模型的代谢组学特征分析

目的 构建冠心病心阳虚痰瘀互结证大鼠模型,阐释其代谢组学特征。方法 采用丙基硫氧嘧啶灌胃联合高脂饮食、腹腔注射维生素D3和皮下注射异丙肾上腺素构建冠心病心阳虚痰瘀互结证模型,通过观察大鼠行为学改变,测定心功能、心电图、耳温、尾静脉脉波、舌象与足底RGB(red,green,blue)值、心肌组织三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量、血脂含量、血液流变学指标、炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-6与肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α含量及甲状腺功能指标,结合主动脉弓组织、心肌组织病理改变对该模型进行评价;应用代谢组学技术筛选出冠心病心阳虚痰瘀互结证大鼠差异代谢物,并进行通路富集分析。结果 冠心病心阳虚痰瘀互结证大鼠表现出精神萎靡、行动迟缓、蜷缩扎堆、耳温降低、毛发缺少光泽,舌象、足底色泽偏淡暗伴RGB值升高,左心室射血分数(ejection fraction, EF)、左心室短轴缩短率(fraction shortening, FS)降低,心电图ST段抬高、脉波增宽;血清中总胆固醇(total chol...     

基于UHPLC Q-Exactive Orbitrap MSn和分子网络技术快速鉴定吴茱萸汤中化学成分

《伤寒论》名方吴茱萸汤是首批《古代经典名方目录》收载品种,全方由吴茱萸、人参、生姜、大枣4味药组成,具有温中补虚、散寒降逆之功,临床应用广泛,疗效显著。经典名方化学组成是其物质基准和量值传递的重要前提,该研究旨在建立高分辨质谱(HR-MS)和分子网络整合的快速分析经典名方吴茱萸汤中化学成分的方法。采用AQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱。分别在正、负离子模式下,采集Q-Exactive Orbitrap MS数据,根据MS/MS碎片模式的相似性创建GNPS分子网络,运用Cytoscape 3.6.1软件筛选结构相似的分子簇,最后根据对照品比对,并结合保留时间信息、高分辨质谱精确相对分子质量和MS/MS碎片信息对吴茱萸汤中化学成分进行快速准确鉴定。在吴茱萸汤中共鉴定出105种化学成分。该研究可为经典名方吴茱萸汤进一步的质量控制、基准物质研究以及药效物质研究等提供参考数据,同时也为中药化学成分的快速定性分析提供借鉴。     

人参-三七-川芎提取物延缓过氧化氢诱导的内皮细胞衰老中线粒体氧化应激的作用

目的 通过观察人参-三七-川芎提取物（GNC）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）衰老中线粒体氧化应激的影响,探讨GNC对衰老HUVECs的治疗机制。方法 本研究以HUVECs作为研究对象,H₂O₂诱导内皮细胞衰老作为模型,实验分为空白组,H₂O₂组,H₂O₂+DMSO组（DMSO）,白藜芦醇组（Resv）及GNC提取物低（GNC-L）,中（GNC-M）,高（GNC-H）质量浓度组,除空白组,H₂O₂组外,其余各组分别给予DMSO 1 mL·L^-1,Resv 8 μmol·L^-1,GNC 400,300,200 mg·L^-1药物干预,24 h后除空白组外给予300 μmol·L^-1 H₂O₂诱导HUVECs衰老,再给予正常培养基培养24 h。采用衰老特异性β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色法鉴定细胞衰老程度,流式细胞仪分析细胞周期,采用Mito SOX RED荧光染色法测定细胞内线粒体活性氧（mtROS）水平,以JC-10为荧光探针检测细胞内线粒体膜电位变化,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测含锰超氧化物歧化酶（MnSOD）与磷酸化（p-）p66的蛋白表达。结果 SA-β-gal染色结果显示,与空白组比较,H₂O₂组SA-β-gal染色蓝染细胞显著增多（P<0.01）;与H₂O₂组比较,各浓度组SA-β-gal染色蓝染细胞显著减少（P<0.01）;细胞周期结果显示,与空白组比较,H₂O₂组G₀/G₁期细胞数量比例明显增多（P<0.05）,G₂/M期细胞比例明显减少（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GNC各组及Resv组G₀/G₁期细胞数量比例明显减少（P<0.05）,GNC-H组,Resv组在G₂/M期细胞比例明显增加（P<0.05）。线粒体ROS荧光结果显示,与空白组比较,H₂O₂组强度明显减弱（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GNC-H,GNC-M组强度明显增高（P<0.05）;线粒体膜电位结果显示,与空白组比较,H₂O₂组荧光强度显著下降（P<0.01）;与H₂O₂组比较,GNC-H,GNC-M,GNC-L组线粒体膜电位荧光强度显著增高（P<0.01）,Resv组明显增高（P<0.05）;Western blot结果显示,与空白组比较,H₂O₂组MnSOD含量明显降低（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GNC-H与GNC-M组表达明显增多（P<0.05）;与空白组比较,H₂O₂组p-p66含量显著增高（P<0.01）;与H₂O₂组比较,各用药组表达显著降低（P<0.01）,表明用药后可减轻细胞内线粒体氧化应激反应。结论 中药人参-三七-川芎提取物可以延缓H₂O₂诱导的血管内皮细胞的衰老,药物干预后,细胞线粒体活性氧、线粒体膜电位及相关蛋白MnSOD,p-p66蛋白发生明显改善,氧化应激反应减轻,其机制可能是中药通过抑制线粒体氧化应激反应延缓血管内皮细胞衰老的进程。     

高效液相色谱串联质谱分析吴茱萸水煎液的化学成分

目的建立吴茱萸中化学成分的液质联用分析方法,研究吴茱萸的化学成分。方法水煎煮提取吴茱萸,运用LC—MS“联用技术得到各化合物的总离子流图和多级质谱图,从而对各色谱峰进行鉴定。结果从吴茱萸提取物中鉴定出14个化合物。结论HPLC—MS。法可用于吴茱萸中3类成分的结构分析,为建立准确的质量评价方法提供了参考。     

荧光分子扩散动态测量在肥大细胞脱颗粒体外检测中的应用

 目的：建立基于荧光分子扩散动态测量的肥大细胞脱颗粒的体外快速评估方法。方法：分别采用β-己糖苷酶法、扫描电镜法及光栅图像关联光谱法（raster image correlation spectroscopy, RICS）对稳定表达CD63-绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的大鼠肥大细胞株RBL-2H3的脱颗粒过程进行评价,比较不同检测方法的灵敏度。结果：β-己糖苷酶法的检测灵敏度为5 mg/L,扫描电镜法的检测灵敏度均为3.9×10-2 mg/L,RICS方法也在3.9×10-2 mg/L即可检测到扩散系数的降低,并与未给药组有显著差异。结论：RICS方法比传统β-己糖苷酶法更灵敏,虽然与电镜方法灵敏度相当,但该方法较扫描电镜法简便易行成本低,易操作,且所观察的指标为扫描电镜所不能做到的活体动态观测,能在细胞脱颗粒早期即可判定过敏反应的发生,具有传统方法不具备的优势,有潜力成为制药企业质量控制的标准方法,或临床过敏性物质筛查的有利工具。     

TLC鉴别方法区别部分中药生品与炮制品的研究

目的:探讨采用TLC鉴别方法区别部分中药生品与炮制品的可行性.方法:以TLC鉴别方法,采用适当方法制备供试品溶液,以5-羟甲基糠醛(5-HMF)为对照品,硅胶GF254薄层板或硅胶G薄层板层析,以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1∶ 1)为展开剂,紫外光灯(254 nm)下检视或喷以15%α-萘酚乙醇溶液,在90℃加热至斑点显色清晰,日光下检视.结果:本方法可区别地黄、黄精、山茱萸、女贞子、肉苁蓉和大黄的生品与炮制品,不能用于区别黄芩和五味子生品与炮制品.结论:在深入研究的基础上,可望用于部分中药生品与炮制品的鉴别.     

桂枝汤有效成分苯丙烯类化合物干预IL-1β刺激小鼠脑微血管内皮细胞释放PGE2的构效关系

前期研究发现,桂枝汤解热有效部位A(Fr.A)在很小剂量(3.8~7.6mg.kg-1,po)即显示了明显的解热活性,并可降低发热动物下丘脑PGE2含量[1],经LC/MS,GC/MS和化学分离确证,其含十余种苯丙烯类化合物,此类化合物为该部位的主要成分。由于Fr.A中除桂皮醛、桂皮醇、2-甲氧基桂皮醛、香豆     

质量常数方法应用于麸炒苍术饮片等级评价研究

目的 将质量常数中药饮片等级划分方法应用于麸炒苍术饮片的等级评价中,以期建立合理的麸炒苍术饮片等级标准。方法 收集来自主要中药材交易市场及其道地产区、主产区的不同厂家、不同规格、不同批号、不同产地的22批麸炒苍术饮片样品,对其外观形态参数、指标成分含量进行测定,通过计算其质量常数（A）及百分质量常数（A%）对22批麸炒苍术饮片样品进行等级划分。结果 所收集的22批麸炒苍术饮片样品的A为0.92~3.37;若将麸炒苍术样品分为3个等级,一等品为A%≥80%（A≥2.70）的麸炒苍术饮片,共有1批;二等品为50%≤A%<80%的麸炒苍术饮片（1.69≤A<2.70）,共有11批;其余10批为三等品,即A%<50 %（A<1.69）的饮片。结论 质量常数方法用于划分麸炒苍术饮片等级是可行的,能更为全面、客观地反映不同等级麸炒苍术饮片的质量。